土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性试剂盒说明书

土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性试剂盒说明书

                                                  微量法100/96S

注  意  ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。

测定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯80mL、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体65mL×2瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。

试剂三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自备）。

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体10 μL×1瓶，10 µmol/mL的标准溶液，4℃保存。临用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

样本处理：

建议称取约0.1g土样，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，再用回旋式振荡器振荡提取15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。

S-LPS测定操作：

1.        分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到710 nm，蒸馏水调零。

2.        试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min。

3.        在1.5mL EP管中依次加入下列试剂

37℃振荡反应10 min

37℃振荡反应10 min后，8000g，25℃，离心10min，取上清液

37℃振荡反应5 min后，静置5min，取200μL上层液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

S-LPS活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土样每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

S-LPS (μmol/min/g 土样) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷（A标准管- A空白管）]×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T

=16×[(A测定管－A空白管)÷（A标准管- A空白管）]÷W

C标准品：10 µmol/mL；V反总：反应总体积，0.8mL；V样：反应中加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL； W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。